Τάσος97
Τιμώμενο Μέλος
Ο Allostasis αυτή τη στιγμή δεν είναι συνδεδεμένος. Είναι Διδακτορικός και μας γράφει απο Ηνωμένο Βασίλειο (Ευρώπη). Έχει γράψει 11,113 μηνύματα.
19-05-18
11:45
Συνήθως στο cloning είτε θα κάνεις RNA isolation και μετά PCR να κάνεις το cDNA το οποίο θα μπει στο πλασμίδιο για έκφραση, είτε θα χρησιμοποιήσεις το πλασμίδιο με το γονίδιο που σε απασχολεί και θα κάνεις απλά fragment amplification βάζοντας τα κατάλληλα restriction sites.Γεια Σας! Έχω μια απορία πάνω στην βιολογια κατεύθυνσης..και θα επιθυμούσα όποιος μπορεί να με βοηθήσει.
Αν μια περιοριστικη ενδονουκλεαση κόβει μεσα στον υποκινητή του γονιδίου.. Και στην συνεχεια μεταφέρεται το γονίδιο μέσα σε ενα πλασμιδιο που διαθέτει υποκινητή..τοτε το γονίδιο θα εκφραστεί;
Για να απαντήσω συγκεκριμένα όμως στην ερώτησή σου, μπορείς να το κάνεις αυτό και το γονίδιο θα εκφραστεί κανονικά εάν 1) το sequence δεν καταλήγει σε stop codon οπότε και δε θα έχεις έκφραση και 2) εάν το γονίδιο εισαχθεί σχετικά κοντά στον promoter που θα χρησιμοποιήσεις για έκφραση, διότι η απόσταση μετράει. Βέβαια το 1 είναι σχετικά απίθανο να συμβεί καθότι θα χρησιμοποιήσεις ένζυμο με sticky ends (π.χ EcoRI) και το μέρος του promoter που θα μεταφέρεις δεν περιέχει κάποιο stop codon.
Ελπίζω να απάντησα στην ερώτησή σου!
Σημείωση: Το μήνυμα αυτό γράφτηκε 5 χρόνια πριν. Ο συντάκτης του πιθανόν να έχει αλλάξει απόψεις έκτοτε.